附 录 A （规范性附录）
乳糖的测定 A.1 原理 牛乳或乳粉样液经沉淀剂澄清后，样液中的乳糖在苯酚、氢氧化钠，苦味酸和硫酸氢钠作用下，生成桔红色的络合物。在波长 520nm 处具有最大的吸收波长，颜色的深浅与乳糖含量成正比，由标准乳糖含量可以计算出样液中乳糖含量。
A.2 试剂 A.2.1 沉淀剂 4.5%氢氧化钡溶液、5%硫酸锌溶液。
A.2.2 发色剂 1%苯酚溶液、5%氢氧化钠溶液、10%苦味酸溶液、1%亚硫酸氢钠溶液，按次序以 1：2：2：1（ V / V ）配成，保存于棕色瓶中，有效期两天。
A.2.3 乳糖标准溶液：
称取含有结晶水的乳糖（C 12 H 22 O 11 ·H 2 O）1.052g 或经 100℃烘至恒重干燥的乳糖 1g，经水解后移入 1L 容量瓶中，并用水稀释至刻度，此溶液每毫升含有 1mg 的乳糖。
A.3 仪器 A.3.1 分光光度计。
A.3.2 离心机。
A.4 样品处理 准确吸取2.0mL（或2.00g）牛乳或1.00g乳粉，用水溶解后移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。吸取0.5mL稀释样液，移入离心管中，添加5%硫酸锌溶液2mL和4.5%氢氧化钡溶液0.5mL，用小玻璃棒轻轻搅拌后，以每分钟2000转的速度进行离心2min～4min，上层澄清液为样品测定溶液。
A.5 操作方法 A.5.1 标准曲线绘制：
准确吸取每毫升相当于1mg乳糖的标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8和1mL，分别移入25mL比色管中，加入2.5mL发色剂，用塑料塞或橡皮塞紧紧塞住，在沸水浴中准确加热6min，取出，立即在冷水中冷却，用水稀释至刻度，于分光光度计波长520nm处测定吸光度，绘制标准曲线。
A.5.2 样品分析 准确吸取1.0mL经离心澄清后的样品溶液或0.5mL经离心澄清后的乳粉溶液，移入25mL比色管中，加入2.5mL发色剂，以下操作按标准曲线绘制的步骤进行，测得样液中的吸光度，从标准曲线查出乳糖的含量。
A.6 计算
乳糖（mg/mL）%=
×100 C W
式中：
C ——从标准曲线查得相当于标准乳糖量（mg）；
W ——吸取比色样液相当于样品的量（mL）。
A.7 说明 本法有效乳糖检验范围为 0.2mg～2.0mg，适用于牛乳、乳粉和酪蛋白乳糖中乳糖的测定。如果样液中有蔗糖、乙醇等存在，也不影响测定结果。